鐵皮石斛種苗組織培養(yǎng)一次成苗技術(shù)即是用一種培養(yǎng)基完成種苗的整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程，一般是以種子為外植體，而且適于外植體培養(yǎng)的種子很少，因此難以滿足市場(chǎng)需求，接下來(lái)小編就來(lái)簡(jiǎn)單說(shuō)說(shuō)鐵皮石斛種苗組織培養(yǎng)一次成苗育苗流程，希望對(duì)大家能有所幫助。

1 材料和方法

1.1 材料

挑選健康、無(wú)病蟲害植株，以莖段作為外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的處理

1.2.1.1 選取長(zhǎng)勢(shì)良好、均勻、葉片繁茂的鐵皮石斛材料，將其莖段從植株上剪下，去掉葉片后，剪取一定長(zhǎng)度的帶節(jié)間莖段，將其放入搪瓷缸中，再將紗布蓋在搪瓷缸口，用流水沖洗20min。

1.2.1.2 之后再將洗衣粉倒在搪瓷缸里，用玻璃棒攪拌均勻，浸泡30分鐘，水沖洗干凈后用75%的酒精浸泡30秒，無(wú)菌水沖洗1次后再用0.1%的升汞浸泡8分鐘，用無(wú)菌水沖洗5-8 次，材料滅菌后應(yīng)立即取出，然后放在無(wú)菌紙上瀝干，留待接種。

1.2.2 一次成苗初代培養(yǎng)基的篩選

1.2.2.1 基本培養(yǎng)基使用MS 和1/2MS，分別添加0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L 的NAA 與1mg/L、3mg/L、5mg/L 的6- BA，在此基礎(chǔ)上添加香蕉泥100g/L、蔗糖30g/L、瓊脂6.5g/L，pH 值為5.8。

1.2.2.2 將所有的組培苗放在光照強(qiáng)度為2000Lx，溫度為（25±2）℃的培養(yǎng)室里，35d 后統(tǒng)計(jì)不定芽的誘導(dǎo)率。

1.2.2.3 不定芽的誘導(dǎo)率（%）= 誘導(dǎo)出芽苗數(shù)/ 未污染的接種數(shù)，統(tǒng)計(jì)并作好記錄，從而篩選出一次成苗的最適培養(yǎng)基。

表1 不同的培養(yǎng)基對(duì)成苗的影響

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)結(jié)果表明，基本培養(yǎng)基為1/2MS 的鐵皮石斛組培苗不定芽的誘導(dǎo)率普遍比基本培養(yǎng)基為MS 的不定芽誘導(dǎo)率高，且長(zhǎng)勢(shì)普遍良好，比基本培養(yǎng)基為MS的組培苗效果更加明顯，誘導(dǎo)的不定芽更多，更加壯實(shí)。

2.2 基本培養(yǎng)基為1/2MS 的鐵皮石斛組培苗明顯長(zhǎng)勢(shì)普遍更佳，組培苗的不定芽數(shù)更多，不定芽長(zhǎng)得更加健壯。

2.3 培養(yǎng)基中不同濃度的激素含量對(duì)組培苗的不定芽的生長(zhǎng)誘導(dǎo)及促進(jìn)有一定程度的差異。

2.4 從整體來(lái)看，培養(yǎng)基中的激素NAA 對(duì)鐵皮石斛組培苗不定芽誘導(dǎo)與生長(zhǎng)的影響隨著其濃度的增高而逐漸開始抑制，由此可見選取合適的培養(yǎng)基激素濃度對(duì)組培苗不定芽的增殖有顯著的促進(jìn)作用。

2.5 鐵皮石斛一次成苗的最適培養(yǎng)基配方為：1/2MS+ 蔗糖30g/L+瓊脂6.5g/L+ 香蕉泥100g/L+NAA 0.5mg/L+ 6- BA3mg/L，pH 值為5.8，這一培養(yǎng)基最利于鐵皮石斛組培苗不定芽的誘導(dǎo)與生長(zhǎng)。

3 討論

3.1 石斛一直被認(rèn)為是中藥中的上品，已在臨床上及中藥復(fù)方中被廣泛應(yīng)用，同時(shí)具有極高的觀賞價(jià)值，在國(guó)際花卉市場(chǎng)上占有重要的地位，作為瀕臨滅絕的受保護(hù)中藥品種之一，市場(chǎng)售價(jià)較高。簡(jiǎn)化鐵皮石斛組培種苗培育的流程，將其投入大規(guī)模的工廠生產(chǎn)可大大降低成本，縮短種苗的繁育時(shí)間，以期推動(dòng)鐵皮石斛的產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程。